多肽裂解儀通過物理、化學或生物方法打斷多肽鏈中的肽鍵,將復雜蛋白質轉化為可分析的肽段。多肽裂解儀其技術路徑主要分為三大體系:
酶解法
原理:利用生物酶(如胰蛋白酶、胃蛋白酶)的特異性切割能力,在溫和條件(如37℃恒溫)下精準識別并斷裂特定氨基酸殘基(如賴氨酸、精氨酸)羧基端的肽鍵。
優勢:裂解產物片段長度均一,適用于多肽序列分析、質譜鑒定等場景。例如,胰蛋白酶可在16小時內將牛血清白蛋白裂解為理論覆蓋度超80%的肽段混合物。
局限:對酶解條件(如pH、溫度)敏感,且難以處理含大量脯氨酸或修飾氨基酸的多肽。
化學裂解法
原理:通過強酸(如6M鹽酸)或強堿(如氫氧化鈉溶液)在高溫(100℃)條件下實現分子級斷裂,適用于難降解的膠原蛋白、角蛋白等。
優勢:裂解效率高,可處理復雜樣本。
局限:反應條件劇烈,可能導致非特異性斷裂或氨基酸側鏈修飾,需后續純化步驟。
物理裂解法
原理:利用激光(如193nm準分子激光脈沖)在納秒級時間內產生局部超高溫,使肽鍵發生非熱力學斷裂。
優勢:無化學試劑殘留,適用于對化學污染敏感的樣本(如臨床診斷標本)。
局限:設備成本高,操作技術要求嚴格。